生物化学实验室

实验室简介:兰州大学生命科学学院教学实验中心生物化学实验室位于兰州大学榆中校区贺兰堂C104,面向生命科学学院和草地农业科技学院二年级学生全体本科生开设生物化学实验。生物化学实验室装配有通风橱整套设备,保证师生在安全的环境中开展实验教学;实验台采用耐酸碱、耐腐蚀、耐高温材料制成,方便学生实验操作;实验室还配有多媒体计算机辅助教学系统,实验内容和实验方法更加形象的展现给学生,大大提高了实验教学效果。生化实验室仪器设配齐全,配有电子天平、分光光度计、旋光仪、高效液相色谱等精密测试仪器以高速冷冻离心机、超低温冰箱、恒温干燥箱、电泳仪等大型仪器,基本满足本科生实验教学。

实验课程介绍:

课程名称:生物化学实验;课程总课时:54; 周学时:4;学分:1.5

生物化学实验作为生物、医学、农林及其他相关专业学生必修的一门重要基础实验课。在强化学生对生物化学及相关学科理论知识的掌握和理解,训练基本技能、动手能力、分析及解决问题能力,培养科研能力、创新能力等方面起着重要的作用。目前,我校生物化学实验围绕氨基酸、蛋白质、糖、核酸、脂类和维生素等生物大分子进行研究,主要包括,糖的提取测定、氨基酸、蛋白质结构、功能及含量测定、核酸的提取及测定等实验。近年来,生物化学实验呈现迅猛发展的局面,新理论、新技术层出不穷已渗透到生命科学的各个领域,地位显得尤为重要。生物化学实验重视实验技术操作,学习的内容主要包括离心技术、分光光度法、层析技术、电泳技术、色谱技术和分子生物学方法等。我校生物化学实验围绕这些方面开展实验教学工作,对于学生的操作技能、基础知识的掌握等方面的培养起到了一定的作用,为学生从事科研工作、提高创新能力等方面打下了坚实的基础。

使用教材:

沈建敏,胡建成,张东凯. 生物化学与分子生物学实验[M]. 兰州:兰州大学出版社,2009.

参考书目:

[1] 李建武,萧能庆,余瑞元,等. 生物化学实验原理和方法[M]. 北京:北京大学出版社,1994.

[2] 张龙翔,张庭芳,李令媛. 生化实验方法与技术. 北京:高等教育出版社,1996.

[3] 陈钧辉,李俊,张太平,等. 生物化学实验:第四版[M]. 北京:科学出版社,2008.

[4] 李建武,萧能庆. 生物化学实验原理和方法. 北京:北京大学出版社,2004.

[5] 陈毓荃. 生物化学实验技术和方法. 北京:科学出版社,2002.

[6] 滕利荣,孟庆繁.生物学基础实验教程. 北京:科学出版社,2008.

[7] 邵雪玲,毛歆, 郭一清. 生物化学与分子生物学实验指导.武汉: 武汉大学出版社,2003.

[8] 赵永芳,黄健. 生物化学技术原理及应用. 北京:科学出版社,2008.

适用年级:

生命科学学院及草地农业科技学院二年级本科生

基本要求:

学习生物化学实验内容原理,掌握实验操作要领,完成实验报告。

教学目的:

强化学生对生物化学及相关学科理论知识的掌握和理解,训练基本技能、动手能力、分析及解决问题能力,培养科研能力、创新能力。


实验项目:

实验一、基本技能和操作技术训练

实验目的:

了解生物化学实验所要使用的仪器。

掌握操作技术。

内容:

包括强调实验室安全规范,所用仪器如电子天平、分光光度计、离心机、电泳仪、高效液相色谱等大型仪器的使用操作方法的讲解,玻璃器皿的清洗及量器的使用等的训练。


实验二、甲醛滴定法测定氨基氮

实验目的:

掌握甲醛滴定氨基氮法测定氨基酸含量的原理和操作要点。

内容:

学习使用甲醛滴定法测定氨基酸含量的方法,了解其优缺点及注意事项


实验三、 2,6- 二氯酚靛酚法测定维生素C含量

实验目的:

学习定量测定维生素C的原理和方法。

进一步掌握滴定法的基本操作技术。

了解松针及一些水果蔬菜中维生素C的含量。

内容

了解维生素C的生理意义,学习掌握实验室测定果蔬中维生素C的方法。


实验四、 蛋白质含量的测定(Folin-酚法、考马斯亮蓝法)

实验目的:

学习测定蛋白质含量的方法。

了解各种测定方法的使用范围。

学习正确使用分光光度计。

内容:

学习蛋白质含量测定的原理和方法,比较两种蛋白质含量测定的特点及使用范围,并学习不同材料中蛋白质的提取及含量测定。


实验五、 牛乳中酪蛋白的提取及含量的测定

实验目的:

学习从牛奶中提取酪蛋白的原理和方法。

掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。

学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的方法与操作技术。

实验内容:

巩固学习酪蛋白的结构和生理特性,学习牛奶中酪蛋白含量的测定,对市场上牛奶品质做出评估,进一步掌握分光光度法测定蛋白质含量的方法。


实验六、酶的特异性、酶促反应动力学

实验目的:

了解酶的特异性、掌握检测其特异性的原理和方法。

学习温度、pH值及激动剂和抑制剂对酶活性的影响。

内容:

增加学生对酶深刻的认识,了解唾液淀粉酶等的专一性,掌握测定酶专一性的研究方法,并从不同角度学习酶的活性,进一步巩固所学理论知识。


实验七、蛋白质的两性性质和等电点的测定

实验目的:

了解蛋白质的两性解离性质及等电点。

学习通过聚沉测定蛋白质等电点的方法。

内容:

学习蛋白质的理化性质,利用醋酸和酪蛋白溶液中醋酸钠配成各种不同pH至的缓冲液,观察酪蛋白在不同pH值溶液中的溶解度,根据酪蛋白洗出沉淀的多少,判定酪蛋白的等电点。


实验八、动物肝脏DNA的提取

实验目的:

了解从动物组织中提取DNA的原理和操作方法。

学习在核酸提取过程中一些重要试剂的作用。

内容:

实验利用核酸在不同的电解质溶液中溶解度的不同,将DNP分离出来,再通过十二烷基硫酸钠处理,将其上蛋白分开,采用有机溶剂沉淀除去蛋白质,最后通过加入适量的乙醇将粗DNA析出。本实验重在培养学生利用简单快捷的方法提取动物组织DNA,加深学生对核酸等大分子物质的认识。


实验九、定磷法测定RNA的含量

实验目的:

学习和掌握定磷法测定核糖核酸和脱氧核糖核酸含量的原理和操作方法。

内容:

首先利用浓硫酸将核酸消化,使有机磷变成无机磷,再利用无机磷与定磷试剂中钼酸铵反应生成磷钼酸铵,磷钼酸铵进一步被还原生成深蓝色的磷钼蓝,在一定的浓度范围内磷钼蓝颜色的深浅与磷的含量成正比,因此可以使用分光光度法测定其吸光值,从而计算无机磷的含量,再换算出核酸的纯度。


实验十、脂肪碘值的测定

实验目的:

学习测定脂肪碘值的原理和操作方法。

了解测定脂肪碘值的意义。

内容:

利用卤素可以与脂肪酸中不饱和键发生加成反应的性质,测定脂肪酸的不饱和程度,从而判定油脂品质的优劣。


实验十一、3, 5 -二硝基水杨酸比色定糖法

实验目的:

掌握水杨酸比色法定塘的原理和方法。

测定马铃薯等植物中还原糖和总糖的含量。

了解多糖的水解

内容:

本实验利用溶解度的额不同,将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来,再通过酸水解法使不具有还原性的糖水解为还原糖,从而测定样品中总糖和还原糖的含量。本实验进一步巩固分光光度计的使用原理和操作方法。


实验十二、薄层层析法鉴定转氨酶的转氨基作用

实验目的:

了解转氨酶作用的生物学意义。

学习谷丙转氨酶的催化原理。

掌握转氨酶活性鉴定的基本原理和操作方法。

内容:

本实验利用薄层层析法鉴定转氨酶的转氨基作用。首先从动物肝脏提取转氨酶,再利用转氨酶的性质,催化丙氨酸和α-酮戊二酸反应生成谷氨酸,最后通过薄层层析法分离谷氨酸和丙氨酸,从而鉴定转氨酶的活性,让学生进一步了解酶的作用性质及生物体内代谢的过程。


实验十三、血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳

实验目的:

学习电泳仪的使用、掌握电泳的原理和操作方法。

定性测定人血清中蛋白质的组分。

了解薄膜电泳在临床生化中的作用。

内容:

学习利用薄膜电泳分离人血清中的蛋白质组分,了解电泳技术在生物化学和分子生物学中的重要意义。


实验十四、液相色谱操作技术

实验目的:

了解高效液相色谱在生物学领域的重要作用。

学习高效液相色谱在使用方法。

内容:

专业实验技术老师讲解、演示高效液相色谱的操作方法以及参数的测定,使每个同学都有机会上机操作,并得到蛋白纯化或制备产物,学会结果的分析处理。